سابقه و هدف: پروتئین Haps در تداخل اولیه هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول با سلول های اپیتلیال دستگاه تنفس انسان نقش کلیدی را بازی می کند. در حالی که دیگر پروتئین های خارج سلولی هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول از نظر ژنتیکی بسیار متغیر می باشند، Haps به میزان قابل توجهی در میان سویه های هموفیلوس آنفلوانزا حفظ شده است. در مطالعات اخیر اثبات شده است که فعالیت اتصالی Haps، در 311 آمینواسید ناحیه کربوکسیل (C-Haps) آن قرار دارد و همچنین نشان داده شده است که C-Haps قادر به القاء پاسخ ایمنی محافظت کننده در مقابل استقرار هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول می باشد.روش بررسی: سازه pET24a-chaps حامل سکانس C-Haps هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول 1766 PTCC ساخته شد. سکانس آمینواسیدی C-Haps این مطالعه با سکانس C-Haps 3 سویه دیگر هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول (p860295, TN106, N187) مقایسه و نواحی آنتی ژنیک آن توسط نرم افزار بیوانفورماتیک تعیین شدند. سازه نوترکیب pET24a-chaps در میزبان اشرشیاکلی سویه BL21(D3E) بیان شد و توسط تکنیکهای SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تائید قرار گرفت. پروتئین نوترکیب C-Haps توسط تکنیک کروماتوگرافی تمایلی تخلیص شد.یافته ها: مقایسه توالی آمینواسیدی rC-Haps مورد مطالعه با سکانس های آمینواسیدی C-Haps موجود در بانک ژن، بیش از 97% همسانی را نشان داد و نمودار آنتی ژنیسیته، 9 جایگاه آنتی ژنیک مشترک و قوی را تعیین کرد که دقیقا در مناطق حفظ شده بین سویه های مختلف هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول مطالعه شده قرار داشت.نتیجه گیری: به دلیل حضور جایگاه های آنتی ژنیک مشترک بین هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول 1766 PTCC و دیگر سویه-های مطالعه شده، بنابراین C-Haps به دست آمده در این مطالعه از نظر تئوری می تواند به عنوان کاندیدای واکسن علیه سویه های مختلف هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول سایر نواحی جغرافیائی نیز به کار رود.

در این مطالعه، بمنظور تعیین میزان رشد هفت ایزوله از هموفیلوس آنفلوانزا تایپ (BHIB)، از چهار محیط کشت مختلف استفاده شد تا بهترین محیط از نظر بالاترین بازده رشد باکتریایی انتخاب گردد. برای این کار چهار محیط براث بکار برده شدند که شامل انفوزیون مغز- قلب (BHIB)، تریپتیکاز سوی (TSB)، مولز هینتون (MHB) و گونوکوکسی (GCB) که به همه آتها دو فاکتور رشد هموگلوبین و ایزوویتالکس، هر کدام بمیزان 1٪ اضافه شده بود. میزان رشد هر ایزوله در هر یک از محیطها توسط اندازه گیری CFU/ml انجام پذیرفت. چهار ایزوله از هفت ایزوله مورد مطالعه بالاترین رشد را در BHIB و دیگر سوشها این میزان را در TSB از خود نشان دادند که به مقدار بیش از CFU/ml 1010 طی 18 ساعت رسید. در مرحله بعد، با هدف انتخاب بهترین ایزوله با بالاترین میزان آنتی ژن پلی ساکارید کپسولی (CPS-b)، مقدار این آنتی ژن در هر ایزوله، که از ترکیبی بنام پلی ریبوفسفات (PRP) ساخته شده، به دو روش مختلف اندازه گیری شد: الایزای ساندویچ غیر مستقیم و بیال. لازم به ذکر است که آنتی بادیهای استفاده شده در این نوع الایزا توسط تزریق واکسن Hib به خرگوش و رت تهیه شد. بالاترین میزان PRP کپسولی متعلق به یکی ازسوش ها با نام گذاری (Hib5s) بود که به میزان mg/lit 321 از این آنتی ژن مهم را تولید کرده بود که متعاقبا می توان از این سوش در واکسن سازی بهره جست.

سابقه و هدف: هموفیلوس آنفلوانزای (Hib) b، یکی از مهم ترین عوامل مننژیت های باکتریایی در کودکان زیر 5 سال، به خصوص در کشورهایی است که واکسیناسیون علیه Hib را انجام نمی دهند. در این مطالعه، ما سروتایپ، سویه های کپسول دار هموفیلوس آنفلوانزای جدا شده از نمونه های بالینی را به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)، تعیین کردیم.مواد و روش ها: در این تحقیق، DNA نمونه های بالینی هموفیلوس آنفلونزا به روش جوشاندن استخراج گردید. سویه های دارای کپسول توسط آغازهای ژن bexA تعیین و نوع سروتاپ سویه های کپسول دار توسط مجموعه آغازگرهای اختصاصی تایپ «a» تا «f» مشخص شد.یافته ها: از 50 سویه هموفیلوس آنفلوانزای جدا شده از نمونه های بالینی، 4 سویه ژن bexA را نشان دادند که تمام آن ها دارای کپسول بودند و هر 4 جدایه، به عنوان سویه های تایپ b تعیین شدند.استنتاج: با توجه به عدم رشد باکتری های تعیین شده در این بررسی در آزمایشگاه های اولیه (جواب های منفی کاذب) و وجود سویه های بیماری زای Hib در نمونه ها بالینی، انجام روش PCR با ژن های اختصاصی روی نمونه ها و موارد مشکوک ضروری به نظر می رسد.

مقدمه: هموفیلوس آنفلوانزای تیپ  HIb) bیا Haemophilus influenza b) یک ارگانیزم کپسول دار و عامل اصلی مننژیت در کودکان در جهان می باشد. آنتی ژن کپسول پلی ساکاریدی HIb یک پلیمر تکراری از ریبوزیل ریبیتول فسفات و مهم ترین عامل ویرولانس و مسبب عفونت های بسیار در کودکان زیر 5 سال به خصوص کودکان زیر 2 سال می باشد. کپسول پلی ساکاریدی کانژوگه با یک حامل پروتئینی، در جلوگیری از چنین عفونت هایی بسیار موثر است.روش ها: در این مطالعه، HIb سویه Atf2 جدا شده از یک کودک مبتلا به مننژیت، در فرمانتور حاوی محیط اصلاح شده Giolitti-Cantoni broth (GC broth) کشت داده شد. کشت حاصل، بعد از غیر فعال شدن با استفاده از روش های مختلف تخلیص و آنتی ژن پلی ساکاریدی (PRP یا Polyribosylribitol phosphate) تهیه شده بعد از عبور از فیلتر 0.25 میکرومتری با توکسوئید کزاز (TT یا Tetanus toxoid) به عنوان حامل پروتئینی کونژوگه گردید. محصول کونژوگه، پس از عبور از ژل سفارز CL-4B جداسازی شد و به عنوان محصول کونژوگه PRP-TT مورد استفاده قرار گرفت.یافته ها: مقدار PRP موجود در محصول کونژوگه 402 میکروگرم از 109 باکتری در هر میلی لیتر تخلیص شد. مقدار پروتئین و اسیدنوکلئیک موجود در PRP مطابق با مقدار توصیه شده توسط Health Organization World (WHO) زیر 1 درصد بود. بازیافت PRP موجود در محصول کونژوگه بعد از استفاده از Sodium deoxycholate (DOC)، 58 درصد بود که نشان دهنده مقدار بالای اتصال PRP و پروتئین اولیه بود. پاسخ آنتی بادی علیه محصول کونژوگه (PRP-TT) تهیه شده در نوزاد رت با نژاد ویستار با روش Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) غیر مستقیم اندازه گیری و بالاترین تیتر برای محصول کونژوگه نسبت به PRP استخراج شده در آزمایشگاه و PRP استاندارد خریداری شده از موسسه بین المللی استانداردهای بیولوژی در لندن (National Institute for Biological Standards And Control یا NIBSC) به دست آمد. در تیتر آنتی بادی به دست آمده برای PRP تخلیص شده و خریداری شده از NIBSC در غلظت برابر آنتی ژن و رقت 1.200 آنتی بادی شباهت زیادی دیده شد که این نشانگر خلوص PRP تهیه شده در آزمایشگاه می باشد.نتیجه گیری: روش تخلیص PRP، کونژوگاسیون و ایمنی زایی محصول کونژوگه در مدل حیوانی نوزاد رت روشی مقرون به صرفه و عملی با خلوص بالا است که می توان از آن درتولید واکسن HIb با حجم بالا (Scale up) استفاده کرد.

استافیلوکوک آرئوس از عوامل مهم عفونتهای بیمارستانی بوده و بیشتر استافیلوکوکهای جدا شده از نمونه های کلینیکی دارای کپسول پلی ساکاریدی می باشند. از 11 سرو تایپ استافیلوکوک کپسولدار، استافیلوکوکType 2  دارای کپسول ضخیم بوده و استافیلوکوک آرئوسTypes (5 & 8)  دارای کپسول نازک هستند کپسول استافیلوکوک آرئوس دارای آنتی ژنهایProtective  می باشد.علیرغم مطالعات انجام شده بر روی خواص ایمونولوژیکی کپسول استافیلوکوک آرئوس نقش کپسول نازک و اپسونین ها در فاگوسیتوز استافیلوکوکTypes (5 & 8)  مشخص نمی باشد در مطالعه حاضر نقش کپسول و کپسول نازک در فاگوسیتوز(Killing)  استافیلوکوکTypes (5 & 8)  در حضور اپسونین ها مورد بررسی قرار گرفته است.در این تحقیق استافیلوکوکهای کپسولدار Type 2 و بدون کپسولstrain H  در محیطBHI  و استافیلوکوک با کپسول نازک در محیط(Type 5)  کلمبیا آگار کشت داده شدند و سپس عمل فاگوسیتوز به روشBoros  انجام گردید. جهت تهیه آنتی بادیهای اختصاصی از سرم خرگوشهای ایمونیزه شده با استافیلوکوک آرئوس تایپ 2 و 5 و سویهH.strain  استفاده شد.فاگوسیتوز(Killing)  استافیلوکوک با کپسول نازک(Type 5)  در حضور آنتی بادیهای اختصاصی و غیر اختصاصی افزایش چشمگیری را نشان داد. استافیلوکوک آرئوسType 2  تنها در حضور آنتی بادی اختصاصی فاگوسیت شد (P<0.007).نتایج بدست آمده در این تحقیق نشان میدهند که فاگوسیتوز(Killing)  استافیلوکوکهای Types (2 & 5) و در حضور آنتی بادی اختصاصی افزایش چشمگیری می یابد. در این مطالعه مشخص شد که آنتی بادی غیر اختصاصی و کمپلمان به تنهایی نیز سبب افزایش چشمگیر فاگوسیتوز استافیلوکوک آرئوسType5 می شود و نتایج حاصل از تحقیقات Xu و همکارانش، این موضوع را تایید می نمایند.

مقدمه: مننژیت باکتریایی یک عفونت جدی و برخی مواقع کشنده است که سیستم عصبی مرکزی را تحت تاثیر قرار میدهد. عامل حدود 95% از مننژیتهای کودکان هموفیلوس آنفلوآنزای تیپ b (hib)، استرپتوکوک پنومونیه، e.coli و استرپتوکوکوس آگالاکتیه میباشند. روش های آزمایشگاهی مرسوم مانند کشت جهت شناسایی عوامل بیماریزای مننژیت، به حدود 36 ساعت یا بیشتر وقت نیاز­دارند. بعلاوه بدنبال درمان ضدمیکروبی قبل ازجمع آوری نمونه، توانایی کشت در تایید وجود میکرو ارگانیسم ایجاد کننده مننژیت در حدود 30% می باشد. بهمین دلیل روشهای غیر کشت نظیر pcr مورد استفاده قرار گرفته اند. اهداف: اهداف اصلی در این مطالعه تشخیص هموفیلوس آنفلوانزای تیپ b با روش pcr و تعیین فراوانی آن با هر دو روش کشت وpcr   بوده است.مواد و روشها: در این مطالعه به مدت یکسال، 300 نمونه مایع مغزی، نخاعی از مرکز طبی کودکان جمع آوری گردید و آزمایشات کشت و  pcrبا استفاده از پریمر های اختصاصی بر روی همه آنها انجام گرفت. یافته ها: از تعداد کل 300 نمونه در 32 مورد نتیجه کشت مثبت بود، که هموفیلوس آنفلوانزای تیپ b در 5 مورد جدا گردید. با استفاده از pcr علاوه بر 5 کشت مثبت، 2 مورد دیگر هم hib تشخیص داده شد. نتیجه گیری و توصیه ها: نتایج این مطالعه نشان داد که هموفیلوس آنفلوانزای تیپ b عامل 6/15 % از موارد مننژیتهای باکتریایی کودکان به شمار میرود. همچنین مقایسه دو روش کشت و pcr نیز نشان داد که روش اخیر در مقایسه با کشت دارای حساسیت و ویژگی 100 % و 99% میباشد. با توجه به این که در مننژیت ضرورت تشخیص و درمان سریع وجود دارد، در صورت وجود امکانات pcr ، استفاده از این روش توصیه میشود.

زمینه و هدف: امروزه استفاده از نانومواد از پرکاربردترین روش های ساخت داروهای نوین است، این مواد در افزایش قابلیت دسترسی داروها به هدف بسیار مفیدند. هدف از این مطالعه دستیابی به نانوواکسنی ایمونوژن علیه مننژیت ناشی از باکتری هموفیلوس آنفلوانزا است.مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، آنتی ژن کونژوگه ای از پلی ریبوزیل ریبیتول فسفات (PRP) هموفیلوس آنفلوانزا و یک مولکول ایمونوژن قوی به نام (Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH و نانو ذره ای با قابلیت جذب سطحی بالا به نام (Poly lactic-co-glycolic acid (PLGA ساخته شد. جهت بررسی قدرت آنتی ژنیسیته، کونژوگه دو قسمتی و سه قسمتی حاصل به موش های آزمایشگاهی نر نژاد SW1 تزریق شد. بدین منظور موش ها به طور تصادفی به پنج گروه تقسیم شدند که به ترتیب PRP، PRP+KLH، PRP-KLH، PRP-KLH-PLGA و PRP-TT را به همراه ادجوانت کامل فروند به صورت درون عضلانی دریافت کردند. در روز 28 بعد از تزریق، خون گیری انجام و نمونه های خونی از نظر افزایش تیتر آنتی بادی اختصاصی با تکنیک الایزا مورد مطالعه قرار گرفتند. جهت بررسی میزان ورود به سلول آنتی ژن تولیدی در سلول های ایمنی از Immune Cell Uptake Assey و تکنیک فلوسایتومتری استفاده شد.یافته ها: نتایج نشان دادند تیتر آنتی بادی IgG در سرم حیوانات ایمن شده با واکسن های کونژوگه افزایش می یابد. یافته ها هم چنین حاکی از افزایش ورود به سلول کونژوگه سه قسمتی حاوی نانو ذره در سلول های ایمنی میزبان است.نتیجه گیری: نتایج حاصل از این مطالعه بیان گر این واقعیت است که آنتی ژن حاوی PLGA به مراتب قدرت جذب و ایمنی زایی بیشتری داشته و می تواند واکسن قوی تری علیه مننژیت هموفیلوسی باشد.

مقدمه: هموفیلوس انفلوانزا شایعترین عامل مننژیت باکتریال در شیرخواران و کودکان (زیر 5 سال در کشورهایی که واکسیناسیون انجام نمی دهند) می باشد. در کشورهای همسایه ایران مثل کویت و عربستان، نزدیک به نیمی از مننژیت های باکتریال کودکان به وسیله هموفیلوس انفلوانزا ایجاد می شوند. اما در بخش های کودکان دانشگاه علوم پزشکی مشهد مننژیت هموفیلوس به ندرت مشاهده می شود.روش کار: در این مطالعه توصیفی – مقطعی برای نشان دادن میزان شیوع مننژیت هموفیلوس در کودکان مشهد، در زمستان سال 1384 آزمایشگاه بخش اطفال بیمارستان امام رضا (ع) مطابق استانداردهای سازمان بهداشت جهانی، برای تشخیص مننژیت باکتریال، ارتقا کیفیت یافت و تمام نمونه های مایع مغزی – نخاعی کودکان (0-15 سال) در طول مدت پژوهش، در این آزمایشگاه مورد بررسی میکروبیولوژیک قرار گرفتند.نتایج: در مدت 140 روز (از 14/10/84 تا 2/3/85) تعداد 230 نمونه مایع نخاعی دریافت شد، که در 98 نمونه (%42.4) افزایش گلبولهای سفید (مننژیت) مشاهده شد. در این 98 مورد مننژیت، 9 مورد (%9.18) مننژیت باکتریال قطعی وجود داشت. عوامل باکتریال مننژیت در این 9 بیمار عبارتند از: هموفیلوس انفلوانزا 4 مورد، پنوموکوک 3 مورد، مننگوکوک 1 مورد و سیتروباکتر 1 مورد. میزان تقریبی بروز مننژیت هموفیلوس انفلوانزا در کودکان زیر 5 سال مشهد 2.31 در 100000 نفر در سال می باشد. میزان تقریبی نمونه گیری مایع نخاع در کودکان زیر 5 سال مشهد 106 در 100000 نفر در سال می باشد.نتیجه گیری: در مجموع از نتایج این بررسی می توان استنباط کرد که: هموفیلوس انفلوانزا شایعترین عامل مننژیت باکتریال در کودکان در مشهد می باشد. میزان بروز مننژیت هموفیلوس انفلوانزا در مشهد بسیار کمتر از حد انتظار است. میزان نمونه گیری مایع نخاع انجام شده در کودکان زیر 5 سال، بسیار کمتر از متوسط قابل قبول سازمان بهداشت جهانی می باشد.

هدف: تعیین پیامدهای بینایی و عوارض جراحی آب مروارید با و بدون برداشتن کپسول خلفی و ویترکتومی قدامی در کودکان 15-10 ساله.روش پژوهش: هفده چشم از 12 کودک 15-10 ساله مبتلا به آب مروارید مادرزادی یا تکاملی، به طور تصادفی در دو گروه قرار گرفتند. برای گروه اول (8 چشم) لنزکتومی، کپسولوتومی خلفی، ویترکتومی قدامی و کارگذاری لنز داخل چشمی اتاق خلفی (PCIOL) و برای گروه دوم (9 چشم) لنزکتومی و کارگذاری PCIOL بدون برداشتن کپسول خلفی و ویترکتومی انجام شد. بیماران حداقل 6 ماه پی گیری شدند. IOL در همه موارد از جنس آکریلیک هیدروفوب بود.یافته ها: متوسط سن بیماران در زمان جراحی 12.3±1.5 سال (10 تا 15 سال) بود. بیماران به مدت 18.7±11.2 ماه (6 تا 36 ماه) پی گیری شدند. میانگین بهترین دید اصلاح شده (BCVA) قبل از جراحی در گروه ویترکتومی 1.0±0.4 لوگمار و در گروه غیرویترکتومی 0.8±0.5 لوگمار بود (P=0.5). میانگین BCVA بعد از جراحی در گروه ویترکتومی 0.1±0.1 لوگمار و در گروه غیرویترکتومی 0.2±0.4 لوگمار بود (P=0.3). کدورت  کپسول خلفی در 3 چشم در گروه غیرویترکتومی مشاهده شد ولی با توجه به خفیف بودن کدورت محل بینایی، به کپسولوتومی با لیزر نیاز نشد.نتیجه گیری: اگر چه لنزکتومی همراه با کپسولوتومی خلفی و ویترکتومی قدامی در کودکان 15-10 ساله روشی امن می باشد ولی انجام آن به نظر ضروری نمی رسد.

هدف: مننژیت باکتریایی یکی از عفونت های جدی و گاهی کشنده است که روی سیستم اعصاب مرکزی تاثیر می گذارد. دانستن علت مننژیت ایجاد شده توسط عوامل ویروسی یا باکتریایی، به دلیل تفاوت در شدت بیماری و نیز درمان آن از اهمیت خاصی برخوردار است زیرا آنتی بیوتیک ها می توانند مانع از گسترش بعضی از این عوامل در بین مردم شوند. نیسریا مننژیتیدس و هموفیلوس آنفولانزا دو عامل مهم بیماری زا هستند که در ایجاد مننژیت حاد باکتریایی دخالت دارند. روش های مختلفی برای شناسایی نیسریا مننژیتیدس و هموفیلوس آنفولانزا استفاده شده است، اما علاوه بر طولانی شدن نیاز به روش های حساس تری برای شناسایی این بیماری زاها می باشد؛ بنابراین زمان آزمایش از حساسیت کمتری برخوردار بوده و انجام آن با مشکلاتی همراه است.مواد و روش ها: در این تحقیق برای شناسایی هموفیلوس آنفولانزا و نیسریا مننژیتیدس از روش (mPCR) Multiplex PCR استفاده شد. تایید اولیه این زیرگونه ها به روش بیوشیمیایی صورت پذیرفت. به منظور شناسایی با استفاده از واکنشmPCR ، دو جفت آغازگر اختصاصی ژن lic-1 برای هموفیلوس آنفولانزا و ژن opa برای نیسریا مننژیتیدس طراحی شد.نتایج: قطعه DNA تکثیر یافته برای هموفیلوس آنفولانزا 150 جفت باز و برای نیسریا مننژیتیدس 320 جفت باز بود. استرپتوکوکوس نمونیا به عنوان کنترل منفی استفاده شد و نتایج PCR آن با آغازگر طراحی شده منفی بود.نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که PCR خصوصا زمانی که نتایج رنگ آمیزی، کشت باکتری یا شناسایی آنتی ژن منفی بوده یا نتوان به طور قطعی نتایج آن ها را تایید نمود، یک تکنیک تکمیلی مفیدی برای تشخیص می باشد.